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百泰派克生物結(jié)合MALDI-TOF質(zhì)譜系統(tǒng)與LC-MS/MS質(zhì)譜系統(tǒng),提供專業(yè)準確的蛋白膠點、膠條、IP樣品,CO-IP樣品蛋白鑒定服務。可鑒定的樣品包括:1D-SDS PAGE分離的蛋白膠條,2DE PAGE中的蛋白膠點,蛋白表達產(chǎn)物,免疫共沉淀(Co-IP)樣品。其中,蛋白質(zhì)樣品的鑒定前處理過程嚴格按照Nature Methods發(fā)表的文章:Universal sample preparation method for proteome analysis進行,保證鑒定試驗中得到更高的肽段覆蓋率。質(zhì)譜鑒定的原理則是基于鳥槍法(Shot-gun):將蛋白條帶或者蛋白溶液酶切成肽段混合物,經(jīng)高效液相色譜分離得到若干較為簡單的組分,進入高分辨率質(zhì)譜儀中進行分析。檢索軟件根據(jù)二級質(zhì)譜信息與相應的數(shù)據(jù)庫比對,結(jié)合匹配度打分及錯配過濾,可得到肽段的確切序列,進而拼接出各蛋白的完整序列,從而實現(xiàn)對蛋白的鑒定。
1D SDS PAGE /2D PAGE gels樣品:
1. Coomassie Blue, SYPRO Ruby 以及Silver stain樣品均可進行蛋白的鑒定試驗;
2. 銀染的樣品有可能與后續(xù)的質(zhì)譜分析不兼容,我們推薦您使用下面的產(chǎn)品或者實驗步驟進行銀染實驗:
ProteoSilver Plus, Sigma (Product # PROTSIL1 or PROTSIL2)
Dodeca Silver Stain, BioRad (Product # 161-0481 or 161-0480)
3. 銀染的樣品請不要進行脫色處理
液體樣品(In solution format):
1. 假如樣品中蛋白量>10ug,我們對樣品的緩沖體系沒有要求;
2. 假如樣品中蛋白量<10ug,樣品準備過程中盡量減少SDS等表面活性劑的使用,并注意降低鹽濃度;
3. 提交樣品過程中,注意提供樣品的緩沖體系和樣品中蛋白的預估含量;
Co-IP樣品:
1. 如果您洗脫的樣品需要跑膠,請按照1D SDS PAGE樣品準備要求準備樣品即可;
2. 如果您直接提交洗脫樣品,我們推薦使用HPH EB (0.5 M NH4OH, 0.5 mM EDTA) 緩沖體系進行蛋白洗脫,保證洗脫緩沖體系與后續(xù)的質(zhì)譜實驗兼容;
樣品運輸:
1. 我們推薦您將樣品凍干后進行運輸,凍干樣品中蛋白非常穩(wěn)定。
2. 液體樣品推薦干冰運輸,短途運輸冰袋也可以。
注意事項: 利用質(zhì)譜進行蛋白樣品的鑒定,在樣品準備過程中需佩戴手套和頭套,盡量避免自身角蛋白(keratin)對樣品的污染。
該項目是中國科學院生物物理所一位老師將她的Co-IP的樣品寄給我們進行蛋白鑒定。得到的部分結(jié)果如下圖所示:
從圖中客戶看出,我們提供的結(jié)果報告中包含鑒定到的蛋白的Accession Number, Peptide coverage, 鑒定出的肽段信息,鑒定出的肽段的修飾信息以及對鑒定到的蛋白的詳細描述。
在技術(shù)報告中,百泰派克會為您提供詳細的中英文雙語版技術(shù)報告,報告包括:
1. 實驗步驟(中英文)
2. 相關(guān)的質(zhì)譜參數(shù)(中英文)
3. 質(zhì)譜圖片
4. 原始數(shù)據(jù)
5. 鑒定的蛋白質(zhì)詳細信息
您只需下單-寄送樣品
百泰派克一站式服務完成:樣品處理-上機分析-數(shù)據(jù)分析-項目報告
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