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單一蛋白質(zhì)或者蛋白混合物的蛋白質(zhì)譜鑒定/分析,以及對(duì)單一蛋白質(zhì)的蛋白序列分析是生物學(xué)研究中經(jīng)常遇到的問(wèn)題。基于質(zhì)譜法獲取蛋白質(zhì)序列的序列信息以及通過(guò)質(zhì)譜法進(jìn)行蛋白質(zhì)質(zhì)譜鑒定,蛋白質(zhì)譜分析從而實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)鑒定,既protein identification,基于LC-MS的蛋白質(zhì)譜鑒定。常見(jiàn)分析包括:質(zhì)譜測(cè)定蛋白分子量,蛋白的N端和C端測(cè)序,蛋白質(zhì)序列分析及,翻譯后修飾位點(diǎn)分析等。
百泰派克公司采用超高分辨率質(zhì)譜技術(shù),基于Thermo Fisher公司的Q Exactive質(zhì)譜儀、LTQ Orbitrap Elite質(zhì)譜儀、Orbitrap Fusion™ Lumos™ Tribrid™ 質(zhì)譜儀,結(jié)合 Nano-LC液相色譜技術(shù),能夠?qū)Φ鞍踪|(zhì)提取物、SDS-PAGE蛋白條帶、2D蛋白膠點(diǎn)、pull-down及co-IP等樣品中的蛋白質(zhì)進(jìn)行高效精準(zhǔn)的蛋白質(zhì)譜鑒定服務(wù)。
1,對(duì)純化蛋白進(jìn)行蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析/質(zhì)譜鑒定;
2,對(duì)蛋白膠點(diǎn),蛋白質(zhì)膠條質(zhì)譜鑒定,蛋白銀染膠質(zhì)譜鑒定,考染/熒光/Zn/Cu2+等類型染色的膠點(diǎn)/膠條樣品進(jìn)行鑒定;可參見(jiàn):蛋白膠點(diǎn)、膠條、IP樣品蛋白質(zhì)鑒定服務(wù)
3,對(duì)pull-down蛋白質(zhì)譜鑒定、IP蛋白互作的IP-MS互作蛋白鑒定、co-IP質(zhì)譜驗(yàn)證互作蛋白,免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜驗(yàn)證,等簡(jiǎn)單混合物樣品中的蛋白樣品進(jìn)行蛋白質(zhì)鑒定/分析。
4,對(duì)復(fù)雜樣品中的未知蛋白質(zhì)進(jìn)行蛋白質(zhì)譜分析/蛋白質(zhì)譜鑒定。即使是非常低濃度的蛋白樣品也可能通過(guò)蛋白質(zhì)譜鑒定
對(duì)于單一蛋白質(zhì)和簡(jiǎn)單蛋白混合物的鑒定,我們保證100%的鑒定率,否則不收任何費(fèi)用。
NanoLC-MS/MS分析簡(jiǎn)單或復(fù)雜混合物中的蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析。樣品可以是來(lái)自于SDS-PAGE凝膠中的條帶或蛋白點(diǎn),也可以是溶液樣品。(我司也提供1D 或2D SDS-PAGE服務(wù),點(diǎn)擊了解詳情。)
樣品前處理
*先,用二硫蘇糖醇(DTT)還原蛋白質(zhì)樣品,用碘乙酰胺(IAA)烷基化。然后用胰蛋白酶對(duì)樣品進(jìn)行消化,一般樣品會(huì)在賴氨酸和精氨酸殘基后發(fā)生斷裂。*后,凍干得到多肽片段。
上機(jī)分析
將樣品用NanoLC的A相重新溶解后上樣,在NanoLC-MS/MS系統(tǒng)下分析。
數(shù)據(jù)庫(kù)檢索
根據(jù)樣品物種來(lái)源從UniProt下載對(duì)應(yīng)物種的蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫(kù),使用MaxQuant、Proteome Discoverer、Peaks等軟件將液質(zhì)聯(lián)用得到的數(shù)據(jù)與數(shù)據(jù)庫(kù)中數(shù)據(jù)進(jìn)行匹配,通過(guò)肽段的一級(jí)和二級(jí)碎片的質(zhì)量在數(shù)據(jù)庫(kù)中找到匹配的蛋白質(zhì),從而鑒定樣品中的蛋白質(zhì)。
如果樣品的物種還沒(méi)有完整的蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫(kù),我們將使用親緣較近物種的蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫(kù)或者是同種模式生物的蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行蛋白鑒定分析。
出具報(bào)告
鑒定報(bào)告中會(huì)包括詳細(xì)的樣品前處理步驟,色譜-質(zhì)譜平臺(tái)參數(shù),以及鑒定得到的蛋白質(zhì)列表和肽段列表。質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)會(huì)通過(guò)網(wǎng)盤形式提供。
您只需把您的樣品收集后提供給我們,后續(xù)所有步驟均由我們完成。百泰派克公司基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)質(zhì)譜鑒定/質(zhì)譜分析服務(wù)包括:樣品前處理-蛋白還原烷基化后使用高度特異性的蛋白酶進(jìn)行蛋白樣品消化,獲得多肽片段;上機(jī)分析-通過(guò)納升級(jí)色譜(nano-flow)結(jié)合高分辨率質(zhì)譜,在*高的靈敏度下對(duì)肽段進(jìn)行分離并使用超高分辨率質(zhì)譜儀采集肽段質(zhì)譜數(shù)據(jù);數(shù)據(jù)庫(kù)檢索-結(jié)合樣品物種對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)成千上萬(wàn)張質(zhì)譜圖進(jìn)行分析(使用Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù),每月更新一次數(shù)據(jù)庫(kù),以確保訪問(wèn)*新數(shù)據(jù)),從而實(shí)現(xiàn)樣品中蛋白的蛋白質(zhì)質(zhì)譜鑒定;到*后出具樣品報(bào)告,均由百泰派克公司一站式完成:
1. 客戶提供了包含一種或多種蛋白質(zhì)的樣品,如膠條,膠帶,溶液或固體樣品,pull-down或co-IP樣品。
2. 百泰派克公司根據(jù)樣品情況,選擇合適的酶,對(duì)來(lái)樣進(jìn)行蛋白酶消化,然后進(jìn)行nanoLC-MS / MS分析。
3. 對(duì)獲取的數(shù)據(jù)進(jìn)行搜庫(kù)分析。
4. 在10-15個(gè)工作日內(nèi)收到報(bào)告。
*如果您的樣品中含有洗滌劑/裂解劑,請(qǐng)?jiān)谒蜆訂沃凶⒚鳌?/p>
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